在微生物實驗中,厭氧箱是維持嚴格無氧環境(通常氧濃度≤10ppm)的核心設備,而培養皿的取放操作是保障厭氧環境穩定的關鍵環節。外界氧氣的微小侵入都可能導致厭氧微生物活性降低、培養失敗,甚至影響整個實驗數據的可靠性。因此,遵循科學的操作順序與防護技巧,是實現無氧環境精準守護的核心前提。
操作前的環境與設備狀態確認,是避免氧氣侵入的第一道防線。首先需通過
厭氧箱的氧濃度監測儀,確認箱內氧濃度已穩定在實驗要求范圍內,若濃度超標需啟動氮氣吹掃或催化劑再生功能,待數據達標后再進行操作。同時檢查厭氧箱的過渡艙密封性,關閉過渡艙外門后觀察壓力變化,確保無漏氣現象——過渡艙是內外環境的緩沖屏障,其密封性直接決定取放過程中氧氣的侵入風險。此外,操作人員需穿戴無菌手套,避免手部污染物帶入箱內,同時提前將培養皿或待轉移物品在超凈工作臺滅菌備用,減少后續操作耗時。
嚴格遵循“過渡艙預處理—箱內操作—過渡艙后處理”的三段式操作順序,是隔絕氧氣的核心保障。第一步為過渡艙預處理:將待放入的培養皿放入過渡艙內,關閉外門后啟動抽真空程序,通常抽至-0.08MPa后保持30秒,再通入氮氣至常壓,重復2-3次“抽真空—充氮氣”循環,利用氮氣置換出過渡艙內的殘留氧氣。對于從箱內取出的培養皿,需先放入過渡艙并關閉內門,同樣執行2次置換循環,避免開箱時箱內無氧環境與外界空氣直接連通。
箱內取放的精細化操作,是避免局部氧氣聚集的關鍵。打開過渡艙內門時動作需緩慢輕柔,避免因氣流沖擊導致箱內氣體紊亂,取放培養皿時應依托箱內無菌操作平臺,減少手臂在箱內的活動幅度與停留時間。取放順序需遵循“先里后外、先重后輕”原則:先取靠箱內深處的培養皿,再取外側的;較重的培養皿先放置穩固,再擺放輕質的,防止傾倒導致操作中斷。同時培養皿應避免堆疊過高,確保箱內厭氧氣體可充分環繞,減少因遮擋形成的局部微氧環境。

操作過程中的細節把控,能進一步降低氧氣侵入風險。取放培養皿時,手指應握持培養皿邊緣,避免觸碰皿蓋與皿底的貼合處,防止密封不嚴導致箱內氣體泄漏。若需在箱內進行培養皿開蓋操作,需將培養皿置于無菌操作區中央,開蓋動作迅速且保持皿蓋內側朝下,減少與空氣的接觸面積。完成取放后,需及時清理箱內操作平臺的雜物,關閉過渡艙內門并再次確認箱內氧濃度,確保無異常波動。
特殊場景的氧氣防護需強化操作規范。對于含有嚴格厭氧微生物的培養皿,取放前可在過渡艙內放置厭氧指示劑,通過顏色變化直觀驗證艙內無氧狀態。若實驗過程中需頻繁取放培養皿,應控制每次操作間隔不低于5分鐘,給箱內環境足夠的緩沖時間,避免連續操作導致的氧濃度累積升高。此外,長期使用的厭氧箱需定期檢查手套密封性與氣體管路通暢性,手套出現老化破損時需立即更換,防止操作時氧氣通過手套縫隙滲入。
厭氧箱內取放培養皿的操作,本質是“流程規范化、動作精細化、狀態可視化”的綜合管控。從過渡艙的氣體置換到箱內的輕柔操作,每一個步驟都圍繞“隔絕氧氣”核心目標展開。只有將規范操作內化為實驗習慣,才能確保厭氧環境的穩定可靠,讓厭氧微生物培養實驗獲得精準、可重復的結果,為微生物研究與應用提供堅實保障。